Mga produkto
Lifecosm SARS-Cov-2-RT-PCR Detection kit para sa 2019-nCoV
Inaasahang paggamit
Ginagamit ang kit na ito para sa qualitative detection ng bagong coronavirus (2019-nCoV) gamit ang throat swabs, nasopharyngeal swabs, bronchoalveolar lavage fluid, plema. Ang resulta ng pagtuklas ng produktong ito ay para lamang sa clinical reference, at hindi ito dapat gamitin bilang ang tanging ebidensya para sa klinikal na diagnosis at paggamot.Ang isang komprehensibong pagsusuri ng kondisyon ay inirerekomenda kasama ng mga klinikal na pagpapakita ng pasyente at iba pang mga pagsubok sa laboratoryo.
Prinsipyo ng inspeksyon
Ang kit ay batay sa one-step na RT-PCR na teknolohiya.Sa katunayan, ang 2019 na bagong coronavirus (2019-nCoV) na ORF1ab at N gene ay pinili bilang mga rehiyon ng target na amplification.Ang mga partikular na primer at fluorescent probe (N gene probes ay may label na FAM at ORF1ab probe ay may label na HEX) ay idinisenyo upang makita ang 2019 na bagong uri ng coronavirus RNA sa mga sample.Kasama rin sa kit ang endogenous internal control detection system (internal control gene probe na may label na CY5) para subaybayan ang proseso ng pagkolekta ng sample, RNA at PCR amplification, at sa gayon ay binabawasan ang mga maling negatibong resulta.
Pangunahing bahagi
| Mga bahagi | Dami（48T/Kit） |
| Solusyon sa reaksyon ng RT-PCR | 96µl |
| nCOV primer TaqMan probemixture（ORF1ab,N Gene,RnaseP Gene） | 864µl |
| Negatibong kontrol | 1500µl |
| nCOV Positibong kontrobersya（l ORF1ab N Gene） | 1500µl |
Sariling reagents: RNA extraction o purification reagents.Negatibo/positibong kontrol: Ang positibong kontrol ay RNA na naglalaman ng target na fragment, habang ang negatibong kontrol ay tubig na walang nucleic acid.Sa panahon ng paggamit, dapat silang lumahok sa pagkuha at dapat ituring na nakakahawa.Dapat silang pangasiwaan at itapon alinsunod sa mga nauugnay na regulasyon.
Ang panloob na reference gene ay ang human RnaseP gene.
Mga kondisyon ng imbakan at petsa ng pag-expire
-20±5 ℃, iwasan ang paulit-ulit na pagyeyelo at pagtunaw ng higit sa 5 beses, may bisa sa loob ng 6 na buwan.
Naaangkop na instrumento
Sa FAM / HEX / CY5 at iba pang multi-channel fluorescent PCR instrument.
Mga kinakailangan sa ispesimen
1. Mga naaangkop na uri ng specimen: throat swab, nasopharyngeal swab, bronchoalveolar lavage fluid, plema.
2. Pagkolekta ng ispesimen (aseptic technique)
Pharyngeal swab: Punasan ang tonsil at posterior pharyngeal wall ng dalawang pamunas nang sabay, pagkatapos ay isawsaw ang swab head sa isang test tube na naglalaman ng sampling solution
Plema: Pagkatapos magkaroon ng malalim na ubo ang pasyente, kolektahin ang naubo na plema sa isang test tube ng screw cap na naglalaman ng sampling solution;bronchoalveolar lavage fluid：Pag-sample ng mga medikal na propesyonal.3.Storage at transportasyon ng mga sample
Ang mga specimen para sa virus isolation at RNA testing ay dapat masuri sa lalong madaling panahon.Ang mga specimen na maaaring makita sa loob ng 24 na oras ay maaaring maimbak sa 4 ℃;ang mga hindi matukoy sa loob ng 24
ang mga oras ay dapat na nakaimbak sa -70 ℃ o sa ibaba (kung walang kondisyon ng imbakan na -70 ℃, dapat silang
pansamantalang nakaimbak sa -20 ℃ ref).Dapat iwasan ng mga specimen ang paulit-ulit na pagyeyelo at pagtunaw sa panahon ng transportasyon.Ang mga specimen ay dapat ipadala sa laboratoryo sa lalong madaling panahon pagkatapos ng koleksyon.Kung ang mga sample ay kailangang dalhin sa malalayong distansya, inirerekomenda ang pag-iimbak ng tuyong yelo.
Mga Paraan ng Pagsubok
1 Sample processing at RNA extraction (sample processing area)
Inirerekomenda na kumuha ng 200μl ng likidong sample para sa pagkuha ng RNA.Para sa mga kaugnay na hakbang sa pagkuha, sumangguni sa mga tagubilin ng komersyal na RNA extraction kit.Parehong negatibo at negatibo
ang mga kontrol sa kit na ito ay kasangkot sa pagkuha.
2 Paghahanda ng PCR reagent (lugar ng paghahanda ng reagent)
2.1 Alisin ang lahat ng sangkap mula sa kit at lasaw at ihalo sa temperatura ng silid.Centrifuge sa 8,000 rpm sa loob ng ilang segundo bago gamitin;kalkulahin ang kinakailangang halaga ng mga reagents, at ang sistema ng reaksyon ay inihanda tulad ng ipinapakita sa sumusunod na talahanayan:
| Mga bahagi | N paghahatid (25µl system) |
| nCOV primer TaqMan probemixture | 18 µl × N |
| Solusyon sa reaksyon ng RT-PCR | 2 µl × N |
| *N = bilang ng mga sample na nasubok + 1 (negatibong kontrol) + 1 (nCOVpositibong kontrol) | |
2.2 Pagkatapos ng lubusang paghahalo ng mga bahagi, centrifuge sa maikling panahon upang hayaang mahulog ang lahat ng likido sa dingding ng tubo sa ilalim ng tubo, at pagkatapos ay i-aliquot ang 20 µl amplification system sa PCR tube.
3 Sampling (lugar ng paghahanda ng ispesimen)
Magdagdag ng 5μl ng negatibo at positibong mga kontrol pagkatapos ng pagkuha.Ang RNA ng sample na susuriin ay idinagdag sa PCR reaction tube.
Takpan ng mahigpit ang tubo at i-centrifuge sa 8,000 rpm sa loob ng ilang segundo bago ito ilipat sa lugar ng pag-detect ng amplification.
4 PCR amplification (amplified detection area)
4.1 Ilagay ang reaction tube sa sample cell ng instrumento, at itakda ang mga parameter tulad ng sumusunod:
| yugto | Ikot numero | Temperatura(°C) | Oras | koleksyonlugar |
| Reversetranskripsyon | 1 | 42 | 10 min | - |
| Pre-denaturationn | 1 | 95 | 1min | - |
| Ikot | 45 | 95 | 15s | - |
| 60 | 30s | pagkolekta ng data |
Pagpili ng channel sa pagtuklas ng instrumento: Piliin ang FAM、HEX、CY5 channel para sa fluorescence signal.Para sa sanggunian fluorescent WALA, mangyaring huwag piliin ang ROX.
5 Pagsusuri ng resulta (Mangyaring sumangguni sa mga pang-eksperimentong tagubilin ng bawat instrumento para sa setting)
Pagkatapos ng reaksyon, i-save ang mga resulta.Pagkatapos ng pagsusuri, ayusin ang panimulang halaga, pangwakas na halaga, at threshold na halaga ng baseline ayon sa larawan (ang user ay maaaring mag-adjust ayon sa aktwal na sitwasyon, ang panimulang halaga ay maaaring itakda sa 3~15, ang pangwakas na halaga ay maaaring itakda sa 5~20, pagsasaayos) sa logarithmic graph Sa threshold ng window, ang threshold line ay nasa logarithmic phase, at ang amplification curve ng negatibong kontrol ay isang tuwid na linya o mas mababa sa threshold line).
6 Quauty control（Kasama ang isang procedural control sa pagsubok） Negatibong kontrol: Walang halatang amplification curve para sa FAM, HEX, CY5 detection channelsn
COV positibong kontrol: halatang amplification curve ng FAM at HEX detection channels, Ct value≤32, ngunit walang amplification curve ng CY5 channel;
Ang mga kinakailangan sa itaas ay dapat matugunan nang sabay-sabay sa parehong eksperimento;kung hindi, ang eksperimento ay hindi wasto at kailangang ulitin.
7 Pagpapasiya ng mga resulta.
7.1 Kung walang amplification curve o Ct value> 40 sa FAM at HEX channel ng test sample, at mayroong amplification curve sa CY5 channel, maaari itong husgahan na walang 2019 new coronavirus (2019-nCoV) RNA sa sample;
.2 Kung ang sample ng pagsubok ay may malinaw na mga curve ng amplification sa FAM at HEX channel, at ang Ct value ay ≤40, mahuhusgahan na ang sample ay positibo para sa 2019 new coronavirus (2019-nCoV).
7.3 Kung ang sample ng pagsubok ay may malinaw na amplification curve lamang sa isang channel ng FAM o HEX, at ang Ct value ay ≤40, at walang amplification curve sa kabilang channel, ang mga resulta ay kailangang muling suriin.Kung pare-pareho ang mga resulta ng retest, maaaring husgahan ang sample na positibo para sa bago
coronavirus 2019 (2019-nCoV).Kung negatibo ang resulta ng muling pagsusuri, mahuhusgahan na negatibo ang sample para sa 2019 new coronavirus (2019-nCoV).
Halaga ng positibong paghatol
Ang ROC curve method ay ginagamit upang matukoy ang reference CT value ng kit at ang internal control reference value ay 40.
Interpretasyon ng mga resulta ng pagsusulit
1. Ang bawat eksperimento ay dapat na masuri para sa mga negatibo at positibong kontrol.Matutukoy lamang ang mga resulta ng pagsubok kapag natutugunan ng mga kontrol ang mga kinakailangan sa pagkontrol sa kalidad
2. Kapag positibo ang FAM at HEX detection channels, maaaring negatibo ang resulta mula sa CY5 channel (internal control channel) dahil sa kumpetisyon ng system.
3. Kapag negatibo ang resulta ng internal control, kung negatibo rin ang FAM at HEX detection channel ng test tube, , nangangahulugan ito na hindi pinagana ang system o mali ang operasyon, t hindi wasto ang pagsubok.Samakatuwid, ang mga sample ay kailangang muling suriin.
